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2021-10-27
公司热点前言：
前文我们聊过，病毒采样管不是一款简单的产品，其中的采样液属于配方产品，各类组分不同浓度的搭配才能保证其性能与稳定性。一款好的灭活型病毒采样液，首先不应干扰到最后环节的核酸检测（避免假阴性）。之前也提到过，高浓度的胍盐，可有效灭活病毒、保存核酸。但是胍盐浓度过高可能会导致提取病毒核酸的过程中胍盐去除不完全，残留的胍盐会抑制PCR体系中反转录酶和聚合酶的活性，从而抑制了PCR反应，会导致核酸检测结果呈现为“假阴性”。
而病毒采样液承载着病毒样本运输的作用，应能确保保存在其中的核酸能够存放更长时间而不降解。我们采样完成后往往不会立即进行检测，而是要再经过一系列的运送，这个过程中若采样液配方不当，便容易使核酸降解，继而造成“假阴性”的漏检后果。
于是我们做了以下实验验证，探究——熊猫体育灭活型采样管是否能保证运输过程中病毒核酸稳定性？
1、 实验依据
对于病毒采样产品来说，其最重要的一项功能是保持病毒核酸稳定，以保证采样后核酸检测结果的准确性。如果病毒的核酸不能在采样液中完好保存，产生降解，会导致后期核酸检测，Ct值偏大，最严重的后果是造成检测结果的假阴性，即漏检。
2、 实验目的
探究病毒在熊猫体育生物病毒采样液中（熊猫体育灭活型病毒采样液、A品牌灭活型病毒采样液）长期放置的核酸检测Ct值有无变化。
3、 实验设计
1）分别用熊猫体育生物MT0501灭活型采样液与A品牌灭活型病毒采样液对比处理检测。
2）病毒样本设置高、低两个浓度。
3）核酸提取时间分别为0h、24h、48h、7天，依次检测各个时间点的核酸。
4、 实验操作
1）配制高、低两个浓度的病毒液。
采用熊猫体育生物病毒分离无血清培养基对病毒原液进行稀释，得到高、低两个浓度的病毒液。高浓度病毒液浓度为105 copies/mL，低浓度病毒液浓度为104 copies/mL。
2）上述高低两种病毒液分别加入1：1的唾液样本，混匀。
取各组采样液：MT0501灭活型采样液与A品牌灭活型病毒采样液900μL，与100μL高低两种病毒液分别于EP管中混匀，室温避光。
3）免裂解核酸提�。ù胖榉ǎ�
a.以上得到的病毒混合液分别取150μL加入至150μL灭活型病毒采样液中进行充分混匀，混匀后室温下放置10分钟后再进行下一步。
向上面的各组EP管中分别加入300μL异丙醇。
b.先混匀磁珠悬浮混合液，再分别加入20μL，涡旋混匀，室温5min。
c.在磁力架上磁分离，上下颠倒使磁珠充分聚集，弃液体。
d.取下离心管，加入800μL纯化液，涡旋混匀，上架，弃净液体。
e.取下离心管，加入100μL洗脱液，吹吸混匀，室温孵育3min。
f.上磁力架，吸取液体（核酸溶液）于新的离心管中。
4）新提取得到的核酸溶液进行荧光定量PCR。
5、 实验结果
1）各组扩增曲线及统计的Ct值。
灭活型病毒采样液检测对比数据：
样本名称 | 病毒浓度 | Ct值（0h） | Ct值（24h） | Ct值（48h） | Ct值（7天） |
熊猫体育-灭活 | 高 | 30.08 | 30.54 | 31.06 | 30.54 |
A品牌-灭活 | 34.01 | 34.14 | 35.21 | NoCt | |
熊猫体育-灭活 | 低 | 34.01 | 34.18 | 33.76 | 34.94 |
A品牌-灭活 | 38.14 | 36.27 | NoCt | NoCt |
6、 实验结论
1）采用熊猫体育生物灭活型病毒采样管采集到的样本，在48小时以内，核酸检测Ct值无显著变化，7天内Ct值不超过5%，核酸分解不超过5%。核酸保持稳定，完全可以满足现实病毒采样与检测的需求。
2）对照A、B品牌的病毒采样管在一周内波动较大，甚至出现了假阴性的实验结果。
