上期文章我们展示了使用熊猫体育纯因子无血清培养基培养出的NK熊猫体育官网对K562的杀伤能力。实验结果表明，当以0.5:1, 1:1, and 2:1的效靶比混入NK熊猫体育官网孵育4h后，K562熊猫体育官网的杀伤数分别为2.53E+04、2.99E+04、3.91E+04，杀伤率分别为51%、60%、78%。

可见经熊猫体育体系培养的NK熊猫体育官网具备正常且有效的对K562熊猫体育官网杀伤效果。

此外，NK熊猫体育官网的杀伤效果也可通过NK熊猫体育官网脱颗粒能力，即CD107a的表达来检测。NK熊猫体育官网被称为大颗粒淋巴熊猫体育官网，其胞浆内含有高浓度以囊泡形式存在的熊猫体育官网毒性颗粒，如穿孔素、颗粒酶等。溶酶体相关膜蛋白-1 CD107为熊猫体育官网脱颗粒的标志物，在MHC缺失靶点的刺激下，CD107a的表达与NK熊猫体育官网介导的靶熊猫体育官网裂解相关，CD107a的阳性率应当有显著上调。

此外，除了在几乎所有分泌熊猫体育官网因子的熊猫体育官网上协同表达外，CD107a也在刺激后不分泌熊猫体育官网因子的大部分NK熊猫体育官网上表达。这些数据表明，使用CD107a作为NK熊猫体育官网功能活性的标志物，可以代表具有杀伤活性的NK熊猫体育官网。

检测步骤

1. K562熊猫体育官网离心后，用不含有IL-2和血浆的NK培养基重悬熊猫体育官网，每孔种2E4个熊猫体育官网。

2. NK熊猫体育官网离心后，用不含有IL-2和血浆的NK培养基重悬熊猫体育官网，按照E:T为2.5：1、1：1分别每孔添加相应量的NK熊猫体育官网。

3. 分别在2H和4H的时候进行荧光显微镜拍照、流式检测CD107a的表达量

NK熊猫体育官网毒性的计算方法=加靶熊猫体育官网刺激的 CD107a 阳性率(%)-CD107a自发表达率 (%)

检测结果

1：镜下观察

2：流式检测

样本一：孵育2h

样本二：孵育4h

实验结论

在不同的效靶比下，CD107a均能够正常表达。随着NK与K562熊猫体育官网孵育时间的延长，CD107a的表达量有明显上调。可见熊猫体育体系培养的NK熊猫体育官网有正常且有效的脱颗粒能力。