2021-02-23
行业热点我们都知道，熊猫体育官网如果要长期保存，需要冻存起来放液氮保存。那怎么样熊猫体育官网冻存才能保证熊猫体育官网能正常复苏，不至于冻存死亡呢?下面我们就来讲讲熊猫体育官网冻存应该注意的一些地方。
1. 保持冻存前熊猫体育官网状态良好
冻存前一定要保证熊猫体育官网状态良好，熊猫体育官网处于对数生长期，否则不管后面怎么处理，冻存后的熊猫体育官网状态必然有影响。若熊猫体育官网密度偏高，培养基已经略微变黄，熊猫体育官网状态正常，需要换液培养2h以上再冻存熊猫体育官网;若已完全变黄，熊猫体育官网死亡超过20%，需要传代后再重新培养至状态正�：笤俣炒嫘苊ㄌ逵偻�
2. 消化、吹打熊猫体育官网按尽量轻柔
冻存后熊猫体育官网培养瓶和培养皿肯定还是会残留一点熊猫体育官网，这些残留的熊猫体育官网加新的培养基继续培养，如果培养正常就可以看出冻存时消化、吹打操作是没有问题的，如果直接死了或者状态不好，那冻存的熊猫体育官网自然也好不到哪里去，问题出在哪就很明显了。
3. 冻存液配方要给合适的
冻存液配方这个其实不同实验室都有自己的习惯，有FBS+10%DMSO的，也有完全培养基+10%DMSO的，还有基础培养基+血清+DMSO=7:2:1 6:3:1 5:4:1，可以说是五花八门，但总体来说，DMSO一般是不超过12%的，血清浓度越高冻存效果也越好，因此需要多冻几次对比合适的配方。
4. 冻存液要提前配置
冻存液使用时要提前配好，不能直接在熊猫体育官网悬液中加DMSO冻存熊猫体育官网，否则DMSO溶解时浓度不均加上溶解放热会损伤熊猫体育官网活性。可以现配先用，也可以多配一点，4度最多可以保存3个月，-20度可以保存一年。熊猫体育官网用冻存液重悬后应尽快放到4度或者程序性冻存盒开始冻存，避免长时间室温状态，因为室温条件下DMSO对熊猫体育官网是有害的。
5. 冻存熊猫体育官网数量选择
通常来说，冻存熊猫体育官网都会有一部分熊猫体育官网死亡，所以冻存剩下的活熊猫体育官网数量才是决定熊猫体育官网复苏后能否正常养起来的关键。一般冻存不容易死的熊猫体育官网数量每管在100-200万就够了，一些冻存很容易死的熊猫体育官网，比如NK92、THP-1、SF9等熊猫体育官网数量要稍微高点，300-400万左右为宜。冻存液一般1ml左右每管，这个基本每个实验室都差不多。
6. 冻存程序选择
冻存的时候可以选择用程序性冻存盒直接放到-80度冻存熊猫体育官网，但要记得异丙醇要及时更换，一般用4-5次异丙醇含水量就超标了，不再适合冻存熊猫体育官网使用。也可以将冻存管依次在4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。-80度不适合熊猫体育官网长期保存，只能短期保存，最好不要超过一周，否则有部分熊猫体育官网系活性可能会下降很厉害，长期保存的熊猫体育官网最好放液氮罐保存。
7. 注意冻存检查
冻存熊猫体育官网后应在同一批次内随机选一只熊猫体育官网复苏检测冻存效果， 如果复苏效果不佳的话需要找到问题所在摸索合适条件重新冻存熊猫体育官网，如果复苏良好的就可以放到液氮里长期保存了。这个也是前面推荐将冻存剩下的熊猫体育官网继续培养的原因，可以有效避免熊猫体育官网冻存失败导致绝种。
